Điện di gel Polyacrylamide là gì
Jul 29, 2024Polyacrylamit Điện di trên gel (PAGE) là một kỹ thuật thường được sử dụng trong hóa sinh, sinh học phân tử và công nghệ sinh học để tách và phân tích các phân tử sinh học, đặc biệt là protein và axit nucleic, dựa trên kích thước và điện tích của chúng. Kỹ thuật này liên quan đến việc sử dụng ma trận gel được tạo thành từ polyacrylamide, một chất tạo thành mạng lưới xốp khi được trùng hợp.
Trong quá trình chuẩn bị gel, các monome acrylamide được trộn với chất liên kết ngang, thường là bis-acrylamide và chất khởi đầu trùng hợp. Hỗn hợp này sau đó được đổ vào khay đúc gel và để polyme hóa, tạo thành gel rắn. Nồng độ acrylamide xác định phạm vi kích thước của các phân tử có thể được phân giải, với nồng độ thấp hơn phù hợp với các phân tử lớn hơn và nồng độ cao hơn phù hợp với các phân tử nhỏ hơn.
Khi gel đã đông đặc, nó được đặt thẳng đứng trong thiết bị điện di gồm hai điện cực nối với nguồn điện. Gel được ngâm trong dung dịch đệm dẫn điện. Các mẫu chứa các phân tử sinh học quan tâm, thường được trộn với chất đệm tải, được nạp vào các giếng được làm bằng gel.
Khi có dòng điện chạy vào, các phân tử sinh học sẽ di chuyển qua ma trận gel. Sự di chuyển xảy ra do điện tích được mang theo bởi các phân tử sinh học và sự tương tác của chúng với ma trận gel. Các phân tử nhỏ hơn di chuyển nhanh hơn qua các lỗ của gel, trong khi các phân tử lớn hơn bị cản trở và di chuyển chậm hơn.
Sau quá trình điện di, gel có thể được nhuộm bằng thuốc nhuộm cụ thể hoặc được xử lý bằng kháng thể để hình dung và phát hiện các phân tử sinh học tách biệt. Hình ảnh gel hoặc mẫu dải thu được có thể cung cấp thông tin về kích thước, hình dạng và độ phong phú tương đối của các phân tử trong mẫu. Các nhà nghiên cứu thường sử dụng PAGE để xác định protein, phân tích phức hợp protein, đánh giá độ tinh khiết của protein và xác định kích thước của các đoạn axit nucleic.